ESTIMATION DE LA CRP SÉRIQUE

 

Principe :
La protéine C réactive est en quelque sorte l'éboueur du sérum, et a tendance à se lier aux particules de phosphatidyl choline en milieu hypercalcique.

Matériel :
Lames propres et dégraissées, flambées puis refroidies juste avant utilisation, un petit flacon d'Intralipid ou de lipoven (nutrition parentérale lipidique), un flacon de chlorure de calcium standard pour coagulation (0.025 M), agitateurs en bois (ou des petites tiges de mil)
Attention : Le flacon d'Intralipid ne se conserve pas bien à l'air libre, pour en prélever, piquer avec une seringue stérile à travers le capuchon en caoutchouc (préalablement désinfecté) pour retirer quelques millilitres (suffisant pour 100 tests). Le flacon d'Intralipid se conserve bien si on enlève pas le bouchon. Si il apparaît un trouble ou un précipité, il faut jeter le flacon.

Technique :
Préparer le réactif extemporanément : mélanger 100 µl d'intralipid ou de lipoven avec 0.6 ml de CaCl2. Bien mélanger par retournement. Pratiquer un prélèvement de sang veineux recueilli sans coagulant. Centrifuger puis recueillir le sérum. Sur une lame ou mieux une petite plaque à agglutination (de préférence à fond noir), déposer 50 µl de sérum et 50 µl du réactif. Mélanger à l'aide du bâtonnet. Le réactif est valable 2 jours.

Interprétation :
Les particules d'Intralipid agglutinent en présence de CRP.
Un seuil d'une dizaine à une quinzaine de mg/l de CRP est nécessaire pour l'apparition de l'agglutination. Il est conseillé de faire quelques tests en milieu hospitalier en parallèle à l'agglutination afin de définir ses propres seuils. On peut aussi récupérer du sérum d'un patient ayant une CRP élevée et l'aliquoter en dans des petits tubes Eppendorf que l'on congèlera, en s'en servant de contrôle positif par la suite.
Une méthode semi-quantitative peut être effectuée en cas d'agglutination positive en diluant l'échantillon de 2 en 2 dans du sérum physiologique. Il est encore une fois conseillé de pratiquer au début l'analyse en parallèle à des dosages immunologiques afin d'affiner la méthode.

On conseille de rendre le résultat en cotation par croix, signifiant le nombre de dilutions de 2 en 2 qui agglutinent. Par exemple : "+" signifiera que seul le sérum pur agglutine, "+++" signifiera que l'agglutination est observée pour un sérum dilué au 1/4 et "+++++" qu'il agglutine au 1/16.
Il y a inflammation aiguë à partir de "++" et infection à partir de "++++".

Réactifs :
CaCl2 0.025 M : mélanger 1 gramme de CaCl2 avec 270 ml d'eau distillée.

Fiche technique :
CRP
Dosage
Cond
Prix 
Revend.
Référence
Temps de manipulation
3
mn
Temps d'incubation
2
mn
Lipoven ou intralipid
standard
250ml
11 F 
pharm.
Frais d'eau distillée
0.02 F 
CaCl2 0.025 M
0.025 M
500g
90 F 
Fisher
A4320184
Frais de chauffage
- F 
TOTAL 
101 F 
Consommables + étalon
0.10 F 
pour
10 000 
tests
Total frais annexes
0.12 F 
soit
8 000 
patients
Amortissement photomètre
- F 
Coût au test par patient
0.01 F 
Coût en réactif par test
0.01 F 
Poids du kit
0.8 Kg
Forfait technicien
0.50 F 
Total général
0.63 F