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ESTIMATION DE LA CRP SÉRIQUE |
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Principe :
La protéine C réactive est en quelque sorte l'éboueur du sérum, et a
tendance à se lier aux particules de phosphatidyl choline en milieu
hypercalcique.
Matériel :
Lames propres et dégraissées, flambées puis refroidies juste avant
utilisation, un petit flacon d'Intralipid ou de lipoven (nutrition parentérale
lipidique), un flacon de chlorure de calcium standard pour coagulation (0.025
M), agitateurs en bois (ou des petites tiges de mil)
Attention : Le flacon d'Intralipid ne se conserve pas bien à l'air libre, pour
en prélever, piquer avec une seringue stérile à travers le capuchon en
caoutchouc (préalablement désinfecté) pour retirer quelques millilitres
(suffisant pour 100 tests). Le flacon d'Intralipid se conserve bien si on
enlève pas le bouchon. Si il apparaît un trouble ou un précipité, il faut
jeter le flacon.
Technique :
Préparer le réactif extemporanément : mélanger 100 µl d'intralipid ou de
lipoven avec 0.6 ml de CaCl2. Bien mélanger par retournement. Pratiquer un prélèvement
de sang veineux recueilli sans coagulant. Centrifuger puis recueillir le
sérum. Sur une lame ou mieux une petite plaque à agglutination (de
préférence à fond noir), déposer 50 µl de sérum et 50 µl du réactif.
Mélanger à l'aide du bâtonnet. Le réactif est valable 2 jours.
Interprétation :
Les particules d'Intralipid agglutinent en présence de CRP.
Un seuil d'une dizaine à une quinzaine de mg/l de CRP est nécessaire pour
l'apparition de l'agglutination. Il est conseillé de faire quelques tests en
milieu hospitalier en parallèle à l'agglutination afin de définir ses propres
seuils. On peut aussi récupérer du sérum d'un patient ayant une CRP élevée
et l'aliquoter en dans des petits tubes Eppendorf que l'on congèlera, en s'en
servant de contrôle positif par la suite.
Une méthode semi-quantitative peut être effectuée en cas d'agglutination
positive en diluant l'échantillon de 2 en 2 dans du sérum physiologique. Il
est encore une fois conseillé de pratiquer au début l'analyse en parallèle à
des dosages immunologiques afin d'affiner la méthode.
On conseille de rendre le résultat en cotation par croix,
signifiant le nombre de dilutions de 2 en 2 qui agglutinent. Par exemple :
"+" signifiera que seul le sérum pur agglutine, "+++"
signifiera que l'agglutination est observée pour un sérum dilué au 1/4 et
"+++++" qu'il agglutine au 1/16.
Il y a inflammation aiguë à partir de "++" et infection à partir de
"++++".
Réactifs :
CaCl2 0.025 M : mélanger 1 gramme de CaCl2 avec 270 ml d'eau distillée.
Fiche technique :
| CRP |
Temps de manipulation
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3
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mn | |||||
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Temps d'incubation
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2
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mn | ||||||
| Lipoven ou intralipid |
Frais d'eau distillée
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0.02 F
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| CaCl2 0.025 M |
Frais de chauffage
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- F
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TOTAL
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Consommables + étalon
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0.10 F
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Total frais annexes
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0.12 F
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Amortissement photomètre
|
- F
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Coût au test par patient
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0.01 F |
Coût en réactif par test
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0.01 F
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Poids du kit
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0.8 Kg
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Forfait technicien
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0.50 F
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Total général
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0.63 F
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