Principe :
L'urée urinaire, plasmatique ou sérique forme avec la diacétylmonoxime un complexe rose stable photomètrable.

Matériel :
6 tubes en verre de 5 ml. réactifs, photomètre, bleuet butagaz, casserole, portoir à tubes en métal.

Prélèvement :
Prélèvement d'urine ou de sang veineux avec ou sans anticoagulant.

Technique :
On part d'un étalon d'urée de 50 mmol/l
Préparer tout d'abord un petit bain marie bouillant.

	SPECIMENS			GAMME D'ETALONNAGE
	BLANC	SERUM	URINE	5 mmol/l	25 mmol/l	50 mmol/l
Sérum, plasma ou étalon		100 µl		10 µl	50 µl	100 µl
urine diluée au 1/10			50 µl
NaCl 0.9%	100 µl		50 µl	90 µl	50 µl
réactif de travail	2.5ml	2.5ml	2.5ml	2.5ml	2.5ml	2.5ml
porter au bain-marie bouillant pendant 8 minutes puis refroidir sous un courant d'eau

• Photomètrer à 520 nm en faisant le zéro sur le blanc. La coloration rose obtenue est stable 2 heures.
• Construire la droite d'étalonnage de type : concentration = f (absorbance)
• Reporter les absorbances obtenues pour les tubes patients et lire les concentrations.
• Domaine de mesure : 0 -60 mmol/l. Diluer au quart avec du sérum physiologique si > 60 mol/l.
• On considère la gamme d'étalonnage stable une dizaine de jours, on passera éventuellement le point 25 mmol/l comme contrôle lors de dosages répétés pendant ces 10 jours.
• Note : on peut avantageusement utiliser une urine dosée puis ajustée à 50 mmol/l pour se fabriquer son étalon. On l'aliquotera ensuite en capsules de 250 µl que l'on congèlera.

Réactifs : Attention : les réactifs sont corrosifs : utiliser gants et masque.

Réactif 1 : dissoudre 4.5 grammes de diacétylmonoxime dans 450 ml d'eau distillée

Réactif 2 : dissoudre 0.45 gramme de thiosemicarbazide dans 250 ml d'eau distillée

Réactif 3 : dans un flacon d'un litre, mélanger successivement :

• 150 ml d'acide sulfurique à 95 %
• 150 ml d'acide phosphorique à 85 %
• 1.8 gramme de sulfate de fer III ammonium
• 150 ml d'eau distillée.

Les réactifs 1, 2 et 3 sont stables 2 ans en flacon brun bouché conservé à l'abris de la lumière.

Réactif de travail : à faire juste avant le dosage et à jeter ensuite.

• Mélanger 2 volumes de R1, 0.5 volume de R2 et 2 volumes de R3. Soit pour 18 ml de solution de travail : 8 ml de R1; 2ml de R2 et 8 ml de R3.

Fiche technique :

UREE	Dosage	Cond	Prix	Revend.	Référence	Temps de manipulation	7	mn
						Temps d'incubation	8	mn
Diacétylmonoxime	solide	50g	268 F	Fisher	A4782705	Frais d'eau distillée	0.04 F
Thiosemicarbazide	solide	25g	260 F	Fisher	A4911605	Frais de chauffage	0.30 F
Acide sulfurique	95%	2.5 litres	207 F	Fisher	A4715852	Consommables + étalon	0.20 F
Sulfate d'ammonium fer III	solide	500 g	207 F	Fisher	A4320085	Total frais annexes	0.54 F
Acide phosphorique	85%	2 litres	234 F	Fisher	A4713501	Amortissement photomètre	1.00 F
		TOTAL	1 176 F			Coût en réactif par test	0.39 F
		pour	4 000	tests		Forfait technicien	0.50 F
		soit	3 000	patients		Total général	2.43 F
Coût au test par patient	0.39 F
Poids du kit	5.1 Kg