Le dosage des protéines plasmatiques peut être effectué de deux manières. La méthode réfractomètrique a notre préférence : elle est peu chère (presque "gratuite"), plus rapide et n'utilise pas de réactifs corrosifs. Cependant, dans les valeurs extrêmes (< à 45 g/l ou > 80 g/l), il est conseillé de contrôler la mesure par une mesure photométrique.

A l'aide d'un petit réfractomètre à main mesurant les protéines totales ainsi que la densité urinaire. Se reporter à l'utilisation du réfractomètre ainsi qu'au mode d'emploi de votre réfractomètre.
Il faut cependant disposer d'un appareil de qualité, permettant la correction automatique des valeurs en fonction de la température (surtout lorsque l'on manipule dans les pays tropicaux).

Principe :
En ajoutant dans des conditions déterminées du sulfate de cuivre et de la soude à une solution de protéines, on obtient une coloration violette photomètrable.

Matériel :
6 tubes en verre de 5 ml, réactifs, photomètre.

Prélèvement :
Prélèvement de sang veineux sans anticoagulant.

Technique :
On partira d'un flacon d'albumine à 20 % qui servira d'étalon (facile à trouver car utilisée en clinique). On effectuera une dilution au 1/20 dans du NaCl 0.9% (50 µl albumine + 950 µl NaCl).
Le sérum est aussi dilué au 1/20 dans du NaCl 0.9% (50 µl sérum + 950 µl NaCl).
Pour éliminer l'interférence d'autres substances biuret positive, un blanc sérum (facultatif mais fortement conseillé) peut être effectué. Il est conseillé de commencer le dosage par la réalisation de ce blanc sérum.

Photomètrer à 540 nm en faisant le zéro sur le blanc. La coloration violette obtenue est stable plusieurs heures. Construire la droite d'étalonnage de type : concentration = f (absorbance)

Calcul des Absorbances :
Sans utiliser le blanc sérum : l'absorbance finale est celle lue pour le tube.
En utilisant le blanc sérum : L'absorbance est égale à : (Absorbance dosage - Absorbance blanc sérum)
Reporter les absorbances obtenues et lire les concentrations.
Domaine de mesure : 40 - 100 g/l.
On considère la gamme d'étalonnage stable une vingtaine de jours, on passera éventuellement le point 75 g/l comme contrôle lors de dosages répétés pendant ces 20 jours.

Réactifs : Réactifs corrosifs : utiliser gants et masque.

Soude décarbonatée : mélanger 35 grammes de soude pure à 35 ml d'eau.

Réactif du biuret : Il faut tout d'abord préparer le flacon dans lequel on conservera le réactif : prendre un flacon brun de 250 ml fermant hermétiquement et y déposer un morceau de paraffine d'une vingtaine de grammes, chauffer le flacon sur le bec Bunsen à l'aide d'une pince et faire fondre toute la paraffine en recouvrant tout l'intérieur du flacon de paraffine fondue. Laisser refroidir et préparer ensuite le réactif :

• 0.3 gramme de sulfate de cuivre.
• 1.2 grammes de tartrate double de sodium et de potassium.
• 6 grammes de soude décarbonatée.
• 0.2 gramme d'iodure de potassium.
• De l'eau distillée en quantité suffisante pour une quantité totale de 200 ml.

Acide acétique à 1% : mélanger 1 ml d'acide acétique et 99 ml d'eau distillée.

Fiche technique :