Il est à noter que la méthode à l'orthotoluidine utilise des réactifs toxiques et carcinogènes. De plus cette méthode est relativement chère.
Certains kits à la glucose oxydase (bioMérieux, Sigma, Biotrol...) sont moins chers, plus précis et à péremption longue. Lorsque l'on a accès à ces distributeurs, l'utilisation de ces kits est conseillée.

Principe :
En milieu acétique et en présence de thiourée, le glucose forme avec l'Orthotoluidine un complexe vert photomètrable.

Matériel :
Pour le dosage : 5 tubes en verre de 5 ml, bleuet butagaz, casserole.
Pour l'étalon de glucose à : 1 petit flacon en verre brun de 100 ml.

Prélèvement :
Le dosage peut se faire sur tous les milieux : sérum, plasma, urine, LCR. Lors de dosage sanguins, on conseille le prélèvement sur tube sec.

Technique :
Les spécimens peuvent être du sérum, de l'urine (confirmation du résultat d'une bandelette urinaire ou du liquide céphalo-rachidien. Lorsque l'on dose une glycorachie, il est conseillé de doser la glycémie en parallèle.
Préparer tout d'abord un petit bain marie bouillant. Diluer ensuite l'étalon au 1/5 en mélangeant 50 m l d'étalon à 10g/l avec 200 m l d'eau distillée.

			GAMME D'ÉTALONNAGE
	BLANC	SPÉCIMEN	1 g/l	2 g/l	4 g/l
Spécimen ou étalon 10g/l		30m l			12m l
Etalon 2 g/l			15m l	30m l
NaCl 0.9%	30m l		15m l		18m l
réactif orthotoluidine	3ml	3ml	3ml	3ml	3ml
Boucher, mélanger et porter exactement 8 minutes au bain-marie bouillant. Refroidir à l'eau 5 minutes.

• Photomètrer à 630 nm en faisant le zéro sur le blanc. La coloration verte obtenue est stable 1 heure.
• Construire la droite d'étalonnage de type : concentration = f (absorbance)
• Reporter les absorbances obtenues pour les tubes patients et lire les concentrations.
• Domaine de mesure : 0.2 - 5 g/l. Diluer au quart avec du sérum physiologique si > 5 g/l.
• On considère la gamme d'étalonnage stable une vingtaine de jours, on passera éventuellement le point 2 g/l comme contrôle lors de dosages répétés pendant ces 20 jours.

Réactifs :

Solution d'orthotoluidine : Réactifs corrosifs : utiliser gants et masque.

• Thiourée pure : 0.15 gramme
• Acide acétique pur : 94 ml
• Orthotoluidine pure : 6 ml.

Dissoudre la thiourée dans l'acide acétique tiède (bain-marie) puis refroidir. Ajouter l'orthotoluidine. Le réactif se conserve 2 mois en petits flacons bruns bouchés placés au réfrigérateur.

Étalon de glucose à 10 g/l : dissoudre 1 gramme de glucose pur anhydre exactement pesé et le dissoudre dans 100 ml (mesurés à la fiole jaugée) d'une solution aqueuse saturée d'acide benzoïque. Conservation indéfinie.

Valeurs normales :

• Glycémie : 0.8 - 1.2 g/l.
• Glycorachie : les 2/3 de la glycémie au même moment soit 0.55 - 0.8 g/l pour une glycémie normale.
• Glycosurie : 0 g/l.

Fiche technique :

GLUCOSE	Dosage	Cond	Prix	Revend.	Référence	Temps de manipulation	7	mn
						Temps d'incubation	8	mn
Orthotoluidine	pure	500ml	220 F	Sigma	635-6	Frais d'eau distillée	0.05 F
Acide acétique	99%	8 litres	742 F	Fisher	A4701901	Frais de chauffage	0.30 F
Thiourée pure	solide	100g	45 F	Sigma	T7875	Consommables + étalon	0.10 F
		TOTAL	1 007 F			Total frais annexes	0.45 F
		pour	2 800	tests		Amortissement photomètre	1.00 F
		soit	1 800	patients		Coût en réactif par test	0.56 F
Coût au test par patient	0.56 F					Forfait technicien	0.50 F
Poids du kit	8.7 Kg2					Total général	2.51 F
Étalon de glucose : conservation à vie.
Acide benzoïque	solide	100g	70 F	Sigma	B7521
Glucose pur anhydre	solide	500g	81 F	Sigma	G5767
		Total ét.	151 F